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内质网存在于除哺乳动物成熟的红细胞外的各种真核细胞中。内质网为由生物膜构成的互相通连的片层隙状或小管状系统，膜片间的隙状空间称为池，通常与细胞外隙和细胞浆基质之间不直接相通。这种细胞内的膜性管道系统一方面构成细胞内物质运输的通路，另方面为细胞内各种各样的酶反应提供广阔的反应面积。内质网的功能与蛋白质的合成、糖类和脂类的合成、解毒、同化作用有关，并且还具有运输蛋白质的功能。
传统的内质网提取方法需要采用较高的离心力或者采用密度梯度离心，对实验室离心机设备要求较高，对实验的操作细致程度要求较高。如果实验室没有能达到50000×g以上的离心力的设备，则没法进行提取。
内质网提取试剂盒(低速离心法)只需要达到20000×g以内的离心力即可提取内质网，一般的常规台式离心机均可以满足使用要求。
本试剂盒可用于各种动物细胞和实体软、硬组织样本的内质网蛋白的提取。
试剂盒以外自备试剂耗材和仪器：
● 离心机● 振荡器● 匀浆机/Dounce匀浆器● 涡旋混匀器● PBS

组份	50T	100T
试剂A：内质网提取液A	25mL	50mL
试剂B：内质网提取液B	10mL	20mL

2～8℃保存，有效期1年。


● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
● 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
● 最好使用Dounce匀浆器匀浆，如果没有，也可用普通玻璃匀浆器匀浆，但是内质网回收率会下降。


细胞内质网提取：

• 取1～2×107个细胞，在4℃，500×条件下离心5分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞；
  
• 用冷PBS洗涤两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
  
• 加入500μL冷的试剂A，置冰上10分钟。
  
• 用Dounce匀浆器匀浆充分匀浆，然后在4℃，1000×g力条件下离心5分钟。
  注：
  ● 先用Dounce匀浆器的松型槌初步匀浆10～20次，再用紧型槌匀浆20～30次。
  ● 每上下一个来回为一次。
  
• 将上清吸入另一预冷的干净离心管。弃沉淀。
  
• 将上清在4℃，11000×g力条件下离心10分钟。
  
• 将上清吸入另一预冷的干净离心管。弃沉淀。
  
• 将上清在4℃，12000～16000×g力条件下离心10分钟。弃沉淀，留上清。
  
• 在上清中加入125μL试剂B，充分混匀。
  注：
  ● 试剂B使用前请充分混匀。
  
• 置2～8℃冰箱静置过夜。
  注：
  ● 静置保存时间不少于10小时。
  
• 在4℃条件下，10000×g离心20～45分钟。
  
• 小心移除上清，收集沉淀。
  注：
  ● 尽可能吸干上清。
  ● 吸取时小心，防止吸掉沉淀。
  
• 沉淀即为内质网。

组织内质网提取：

• 取50～100mg新鲜动物组织样本，用PBS洗涤干净。
  
• 用剪刀尽可能剪碎，用冷PBS洗涤两次。
  
• 加入500μL冷的试剂A，置冰上10分钟。
  
• 用Dounce匀浆器充分匀浆30～40下，至无明显固体团块。然后4℃,1000×g力条件下离心5分钟。
  注：
  ● 先用Dounce匀浆器的松型槌初步匀浆10～20次，再用紧型槌匀浆20～30次。
  ● 每上下一个来回为一次。
  
• 将上清吸入另一预冷的干净离心管。弃沉淀。
  
• 在4℃，11000×g力条件下离心10分钟。
  
• 将上清吸入另一预冷的干净离心管。弃沉淀。
  
• 将上清在4℃，12000～16000×g力条件下离心10分钟。弃沉淀，留上清。
  
• 在上清中加入125μL试剂B，充分混匀。
  注：
  ● 试剂B使用前请充分混匀。
  
• 置2～8℃冰箱静置过夜。
  注：
  ● 静置保存时间不少于10小时。
  
• 在4℃条件下，10000×g离心20～45分钟。
  
• 小心移除上清，收集沉淀。
  注：
  ● 尽可能吸干上清。
  ● 吸取时小心，防止吸掉沉淀。
  
• 沉淀即为内质网。

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